phương pháp Nuôi cấy vi sinh vật Kỵ khí
những cách Nuôi cấy VSV Kỵ khí
phương pháp Nuôi cấy vi sinh vật Kỵ khí Là phương pháp dùng Phân lập vi khuẩn kỵ khí – mà chỉ phát triển trong điều kiện thiếu oxy và lúc có mặt carbon-di-oxide (20%)Có rộng rãi bí quyết khác nhau để tạo môi trường kỵ khí nhưng cốt yếu là 2 cách sau:
- bí quyết đầu tiên điều kiện kỵ khí Có thể được tạo nên trong một buồng kín – lọ kỵ khí (McIntosh & Filde’s jar) – được khiến bằng thép không gỉ hoặc bằng nhựa polycarbonate / polypropylene.
- bí quyết thứ hai , điều kiện yếm khí Có thể được tạo nên bởi sử dụng môi trường kỵ khí trong ống nghiệm (có chứa chất khử) sản xuất điều kiện yếm khí.
a. cách thiết lập điều kiện kị khí trong bình kị khí:
– phương pháp gói tạo kỵ khí – Gas pack:
- Gas pack được tiêu thụ trong thương mại và được dùng đa dạng bây giờ.
- Gas-pack là một gói tiêu dùng 1 lần có chứa viên sodium borohydride, coban clorua, axit xitric và sodium bicarbonate.
- những hóa chất này tạo nên hydro và carbon dioxide khi nước được thêm vào (khoảng 10 ml) (một số gaspak không phải nước)
- Hydrogen hài hòa với oxy với sự có mặt của 1 chất xúc tác.
- Sau lúc những đĩa cấy được đặt vào trong một bình kín khí, gói “Gas-pak” với nước được thêm vào, được giữ bên trong và nắp được đóng chặt.
- AnaeroPack- Anaero của hãng Mitsubishi
- Anaerogen Oxoid (Thermo Scientific)
- Anaerocult® A – Merck
- Bình ủ kị khí dạng đứng: Bình kỵ khí 2.5 lít là một phần quan trọng trong hệ thống nuôi cấy kỵ khí. Bình được kiểu dáng để sử dụng với túi tạo môi trường kỵ khí 2.5 lít và chứa được 12 đĩa petri
- Bình ủ kị khí nhựa nằm ngang – Nhật: Bình ủ nhựa được bề ngoài chuyên biệt dùng trong nuôi cấy vi sinh kỵ khí: Helicobacter spp, Campylobacter spp, Clostridium spp, Hemophillus spp, Neisseria spp,… gồm 2 không gian cơ bản 2,5 lít ( 12 đĩa petri 90mm ) và 7 lít ( 42 đĩa petri 90mm).
- Bình ủ kỵ khí bằng kim loại: Dung tích: 3L; Kích thước: đkính 120 x cao 270mm; Đựng được 15 đĩa Petri 100mm; Cấu tạo thân bằng thép không gỉ; Nắp nhựa trong, trông thấy được bên trong.
b. cách thay đổi ko khí
- Điều này được thực hiện bằng cách rút không khí có trong bình ra và khiến đầy hydro và carbon dioxide.
- Bình yếm khí được cung cấp đầu vào và đầu ra và van sức ép
- Vừa khí vào được chuyển vào trong bình – nhưng đồng thời khí ra được rút ra.
- Sau lúc đặt những đĩa và chất xúc tác palladium vào thì đóng chặt bình
- không khí còn lại (oxy từ trước) được hút ra bằng bơm hút chân không
- thứ 1 Khí hydro (90%) được bơm vào, kế tiếp là carbon dioxide (10%) và ủ.
+ Robertson’s Cooked Meat (RCM) Broth:
các hạt thịt nấu chín được tiêu thụ như một chất khử để hấp thụ oxy.
- Vi khuẩn kị khí dùng giết thịt – phân giải đạm. Ví dụ: Cl. tetani
- Vi khuẩn kị khí tiêu dùng carbohydrate trong làm thịt – phân giải đường. Ví dụ: Clostridium perfringens
Thioglycollate được tiêu thụ như 1 chất khử hấp thụ ôxy.
- phát triển vi khuẩn xác nhận bởi độ đục.
đảm bảo chính hãng
Để đánh giá xem quy trình có hoạt động hay ko người ta sẽ đặt chỉ thị vào bên trong hộp ủ kị khí, có 2 dạng chỉ thị:
- Chỉ thị hóa học: Chỉ thị màu xanh methylene – chuyển sang màu trắng khi giảm điều kiện kị khí.
- Chỉ thị sinh học: Pseudomonas aeruginosa (vi khuẩn hiếu khí) sẽ lớn mạnh ví như điều kiện kỵ khí ko được duy trì.